امیجنگ کے دوران لائیو سیل امیجنگ سسٹم میں سیل کی قابل عملیت کو برقرار رکھنے میں مسائل

لائیو سیل امیجنگ بایومیڈیکل ریسرچ کے مضامین کا مطالعہ کرنے والی لیبارٹریوں میں ایک اہم تجزیاتی ٹول ہے، جیسے سیل بائیولوجی، نیورو بائیولوجی، فارماسولوجی، اور ڈیولپمنٹ بائیولوجی۔ فکسڈ سیلز اور ٹشوز کی امیجنگ (جس کے لیے فوٹو بلیچنگ اہم مسئلہ ہے) کے لیے عام طور پر روشنی کی زیادہ شدت اور طویل نمائش کا وقت درکار ہوتا ہے۔ تاہم، زندہ خلیوں کی تصویر کشی کرتے وقت ان سے بچنا چاہیے۔ لائیو سیل مائکروسکوپی میں عام طور پر تصویر کے معیار کو حاصل کرنے اور صحت مند خلیوں کو برقرار رکھنے کے درمیان سمجھوتہ شامل ہوتا ہے۔ اس لیے، روشنی کی زیادہ شدت اور طویل نمائش کے وقت سے بچنے کے لیے، ایک تجربے میں مقامی اور وقتی قراردادیں اکثر محدود ہوتی ہیں۔ امیجنگ لائیو سیلز میں آپٹیکل مائیکروسکوپی کے لیے متضاد بہتر امیجنگ طریقوں کی ایک وسیع رینج شامل ہوتی ہے۔ زیادہ تر تحقیقات فلوروسینس مائیکروسکوپی کی بہت سی اقسام میں سے ایک استعمال کرتی ہیں، اور یہ اکثر منتقل شدہ روشنی کی تکنیکوں کے ساتھ مل جاتی ہے، جس پر ذیل میں بات کی جائے گی۔ امیجنگ کی تکنیکوں اور فلوروسینٹ پروبس کے ڈیزائن میں مسلسل پیش رفت اس نقطہ نظر کی طاقت کو بہتر بناتی ہے، اس بات کو یقینی بناتی ہے کہ لائیو سیل امیجنگ حیاتیات میں ایک اہم ذریعہ بنے گی۔

ایک اہم احتیاط اس بات کو یقینی بنانا ہے کہ خلیات اچھی حالت میں ہوں اور مائکروسکوپ اسٹیج پر مصنوعی فلوروفورس یا فلوروسینٹ پروٹین کی موجودگی میں روشنی کے ساتھ کام کر رہے ہوں۔ وہ حالات جن کے تحت خلیات کو خوردبین کے مرحلے پر برقرار رکھا جاتا ہے، اگرچہ وسیع پیمانے پر متغیر ہے، اکثر کسی تجربے کی کامیابی یا ناکامی کا حکم دیتے ہیں۔

مختلف سیل کلچر میڈیا خلیات کی مخصوص بائیو کیمیکل ضروریات کی بنیاد پر دستیاب ہیں۔ کلچر میڈیا مختلف اجزاء پر مشتمل ہوتا ہے، بشمول امینو ایسڈ، وٹامنز، غیر نامیاتی نمکیات (معدنیات)، ٹریس عناصر، نیوکلک ایسڈ کے اجزاء (بیسز اور نیوکلیوسائیڈز)، شکر، ٹرائی کاربو آکسیلک ایسڈ سائیکل انٹرمیڈیٹس، لپڈز، اور کو-انزائمز۔ ٹشو کلچر میڈیا میں، ایک اہم قدم آکسیجن کے ارتکاز، پی ایچ، بفرنگ کی صلاحیت، آسمولریٹی، چپکنے والی، اور سطح کے تناؤ کو کنٹرول کرنا ہے۔ تجارتی طور پر دستیاب میڈیا فارمولیشنز میں اکثر پی ایچ کی تخمینی قدر کا بصری طور پر تعین کرنے کے لیے ایک اشارے کا رنگ (جیسے، فینول ریڈ) شامل ہوتا ہے۔ تقریباً تمام سیل لائنوں کے لیے پی ایچ کو ریگولیٹ کرنے کے لیے کاربن ڈائی آکسائیڈ اور بائی کاربونیٹ بفر سسٹم کی ضرورت ہے۔ خلیات کو ایسے ماحول میں کلچر کرنے کی ضرورت ہے جس میں انکیوبیٹرز میں کاربن ڈائی آکسائیڈ کی تھوڑی مقدار (عام طور پر 5–7%) ہو تاکہ تحلیل شدہ گیس کے ارتکاز کو کنٹرول کیا جا سکے۔ لائیو سیل امیجنگ کے لیے، کاربن ڈائی آکسائیڈ کے ساتھ مناسب ماحول فراہم کرنا مشکل ہو سکتا ہے، اور اس کے لیے عام طور پر ریگولیٹڈ ماحول کے لیے خاص طور پر ڈیزائن کردہ کلچر چیمبرز کی ضرورت ہوتی ہے۔ سیل لائنوں کے درمیان آکسیجن کی ضروریات مختلف ہو سکتی ہیں، لیکن عام ماحول میں آکسیجن تناؤ کی سطح زیادہ تر ثقافتوں کے لیے موزوں ہوتی ہے۔ osmolarity کے حوالے سے، زیادہ تر سیل لائنوں میں osmotic دباؤ کے لیے بڑی رواداری ہوتی ہے، osmolarities میں 260 اور 320 milliosmolar کے درمیان اچھی نشوونما ہوتی ہے۔ جب خلیے کھلی پلیٹ کلچرز یا پیٹری ڈشز میں اگائے جاتے ہیں تو بخارات سے نمٹنے کے لیے ہائپوٹونک میڈیم استعمال کیا جا سکتا ہے۔